博凯森提供高质量的全基因组扩增（WGA）服务，助您在单个细胞层面上发现 DNA 突变。
单细胞DNA测序简介
在体细胞基因组中，随机出现的低丰度突变往往难以被准确检测和鉴定。为了克服这一挑战，并揭示组织内部的突变异质性，单细胞测序成为关键手段。
全基因组扩增技术（WGA）应运而生，成为实现单细胞或极微量样本 DNA 突变检测的核心工具。我们通过优化 WGA 技术，从单个细胞的单拷贝基因组 DNA 中扩增足量产物，从而实现后续的高通量测序和变异检测。对样本进行扩增后，可直接用于下游的测序分析，极大缓解了起始DNA量不足的问题。
博凯森提供多种 WGA 技术服务，能够准确复制来源 DNA，具有最低的假阳性率。其成熟的实验流程可广泛用于全基因组中拷贝数变异（CNVs）和单核苷酸变异（SNVs）的检测。
应用领域:
- 检测单细胞或超微量 DNA 样本中全基因组范围的 CNVs 和 SNVs
- 实现单细胞水平的外显子组碱基分辨率分析
单细胞 DNA 测序流程
得益于流式细胞术与微流控等细胞分选技术的进步，单细胞捕获已成为常规操作。优化后的 WGA 可提供高产量的全基因组 DNA，为后续测序提供坚实基础。以下为通用实验流程：
服务说明
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样本要求
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测序平台
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生物信息分析
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交付内容
- 原始测序数据（FASTQ 文件）
- 实验报告
- 生物信息分析报告
- 可用于发表或撰写的单细胞测序详细技术说明（可定制）
博凯森的单细胞 DNA 测序服务专注于揭示细胞在组织和器官中的异质性，从而深入理解疾病的起源。如需个性化需求或有任何疑问，欢迎随时与我们联系。
Reference
Deleye, L et al. Performance of four modern whole genome amplification methods for copy number variant detection in single cells. Scientific reports, 2017 Jun 13; 7(1): 3422.
Dong, X et al. Accurate identification of single nucleotide variants in whole genome amplified single cells. Natare Methods. 2017 May; 14(5): 491–493.
1. 单细胞基因组扩增的原理、优缺点i. MDA (多重置换扩增，Multiple Displacement Amplification)
该方法由 Laskin 等人于 2001 年发明。该技术采用随机六聚体引物和具有强链置换能力的 φ29 DNA 聚合酶，在等温条件下可扩增长度达 50~100 kb 的 DNA 片段。由于 φ29 DNA 聚合酶具有 3′→5′ 外切酶活性和校对功能，因此该方法具有较高的保真性。 MDA 方法的优势在于其基因组覆盖度较高，适用于对整体基因组信息完整性要求较高的研究。
ii. MALBAC (多次退火与环化扩增循环，Multiple Annealing and Looping–Based Amplification Cycles)MALBAC 采用拟线性扩增策略，显著降低了指数扩增过程中的序列偏好性。其引物的 5′ 端为一段 27 bp 的通用序列，3′ 端为 8 个碱基的随机序列，可在 1520°C 的低温条件下与模板结合，先进行 812 个循环的拟线性扩增后再进行指数扩增。
MALBAC 的优势在于：其扩增偏好性在不同细胞间具有高度重复性，扩增均一性更好，因此更适用于拷贝数变异（CNV）分析。 但其劣势在于所用聚合酶的保真性不如 φ29 DNA 聚合酶，因此在检测单核苷酸变异（SNV）时假阳性率较高；此外，由于其具有可重复的序列偏好，某些在基因组中扩增效率较低的区域可能会在扩增过程中丢失
